
山東富舜新材料科技有限公司
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磷酸鈣的聚集有兩條途徑,一是磷酸鈣被小管細(xì)胞內(nèi)吞的途徑。
通過顯微鏡觀察患者的組織切片,可以在亨氏袢細(xì)胞的基底膜中發(fā)現(xiàn)磷酸鈣。磷酸鈣結(jié)晶物曾多次被證實(shí)存在于小管管腔內(nèi),磷酸鈣球粒通過細(xì)胞內(nèi)吞或者穿過細(xì)胞間隙被轉(zhuǎn)運(yùn)到了基底膜或是間質(zhì)組織。大的結(jié)晶或結(jié)晶團(tuán)可以被小管上皮細(xì)胞所覆蓋。因此,通過不斷內(nèi)吞,磷酸鈣結(jié)晶可以通過小管細(xì)胞在小管外過度聚集,直到突破上皮,形成斑塊,成為其他結(jié)晶的附著點(diǎn)。然而小管細(xì)胞內(nèi)吞途徑似乎有另一項(xiàng)重要的作用,就是防止管內(nèi)結(jié)晶堵塞小管。小管細(xì)胞以及間質(zhì)中的巨噬細(xì)胞內(nèi)的溶酶體可以溶解這些磷酸鈣和草酸鈣。正常人的小管上皮下組織中并不存在磷灰石沉積。如果間質(zhì)組織中著足夠高水平的磷酸鈣濃度,那么鈣離子和磷酸根離子被排泄到周圍間質(zhì)組織中后又可重結(jié)晶。








提高磷酸鈣轉(zhuǎn)染法效率的共通步驟,目的都是為了避免產(chǎn)生會(huì)被細(xì)胞內(nèi)吞、加工失效的大顆粒沉淀。
提高轉(zhuǎn)染效率的操作有以下這些:
1、將小分子DNA整合在高分子質(zhì)量基因組DNA上,以大分子作為運(yùn)載體,能提高轉(zhuǎn)染效率。
2、測試緩沖液適合的ph,可制備幾批pH范圍為6.90~7.15的HEPES鹽緩沖液,分別測試緩沖效率,找到適pH值。
3、使用轉(zhuǎn)染促進(jìn)劑,如甘油、氯喹、其他可購買的轉(zhuǎn)染促進(jìn)劑。因?yàn)檫@些試劑對細(xì)胞有一定毒性,因此,應(yīng)針對每種細(xì)胞系通過實(shí)驗(yàn)確定轉(zhuǎn)染促進(jìn)劑處理的佳時(shí)機(jī)、時(shí)長和強(qiáng)度。
除了這些共通的步驟,不同廠家還會(huì)對混勻DNA和磷酸鈣的速度有要求。有些方法要求只能輕輕攪動(dòng),有些建議用移液器溫和吹吸混勻,有些則提倡應(yīng)緩慢混合。
因此,在使用磷酸鈣轉(zhuǎn)染時(shí),應(yīng)針對不同試劑和細(xì)胞系,耐心調(diào)整實(shí)驗(yàn)參數(shù),才是獲得高轉(zhuǎn)染效率的關(guān)鍵。


磷酸鈣(此處只討論正磷酸鈣)廣泛存在于自然界和生物體內(nèi),更是一類常用的生物材料。磷酸鈣家族包含多種物相,然而基于不同的性質(zhì),各種物相的體內(nèi)生物作用和應(yīng)用方向也有所差異。如脊椎動(dòng)物的骨骼和牙齒的主要無機(jī)成分為羥基磷灰石,但其形成的前驅(qū)相被認(rèn)為是非晶磷酸鈣,中間相為二水合磷酸氫鈣或磷酸八鈣;病理性礦化的成分包括羥基磷灰石、磷酸氫鈣、焦磷酸鈣等;在生物應(yīng)用方面,羥基磷灰石是常見內(nèi)植物表面涂層的成分,而高溫?zé)Y(jié)的生物陶瓷主要為磷酸三鈣,鈣磷基骨水泥的水化產(chǎn)物常為二水合磷酸氫鈣等。
磷酸鈣的晶相基本都是20世紀(jì)之前發(fā)現(xiàn)(非晶相發(fā)現(xiàn)于上世紀(jì)50年代)、20世紀(jì)準(zhǔn)確表征的,之后再無典型(非摻雜、非取代、只包含Ca、P、O、H)的新晶相報(bào)道。此外對于鈣磷摩爾比為1:1的磷酸鈣,目前只見到兩種類型:二水合磷酸氫鈣(brushite, CaHPO4?2H2O,透磷鈣石相,我們戲稱為“大寶”)和無水磷酸氫鈣(monetite,CaHPO4,三斜磷鈣石相,我們稱為“三寶”),而含有一個(gè)結(jié)晶水的“二寶”晶相至今未曾發(fā)現(xiàn)。


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馮山霞女士
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